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济南组培设备​常用的灭菌方法

作者:腾昊组培室 发布时间:2018-10-10 10:43 浏览次数:

文章来源:腾昊组培室

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济南组培设备常用的灭菌方法可分为物理的和化学的两类,即:

物理方法如干热(烘烧和灼烧)、湿热(常压或高压蒸煮)、射线处理(紫外线、超声波、微波)、过滤、清洗和大量无菌水冲洗等措施;化学方法是使用升汞、甲醛、过氧化氢、高锰酸钾、来苏水、漂白粉、次氯酸钠、抗菌素、酒精化学药品处理。这些方法和药剂要根据工作中的不同材料不同目的适当选用。 

济南组培设备养基用湿热灭菌:

培养基在制备后的24小时内完成灭菌工序。高压灭菌的原理是:在密闭的蒸锅内,其中的蒸汽不能外溢,压力不断上升,使水的沸点不断提高,从而锅内温度也随之增加。在0.1MPa的压力下,锅内温度达121℃。在此蒸汽温度下,可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。

注意完全排除锅内空气,使锅内全部是水蒸气,灭菌才能。高压灭菌放气有几种不同的做法,但目的都是要排净空气,使锅内均匀升温,保证灭菌。常用方法是:关闭放气阀,通电后,待压力上升到0.05MPa时,打开放气阀,放出空气,待压力表指针归零后,再关闭放气阀。

济南组培设备常用的灭菌方法

关阀再通电后,压力表上升达到0.1MPa时,开始计时,维持压力0.1-0.15MPa,20分钟。

按容器大小不同,保压时间有所不同,见表。该表所列数字是灭菌很保险的数字,如果容器体积较大,但是放置的数量很少,也可以减少时间。 

济南组培设备培养基高压蒸汽灭菌所必需的少时间

容器的体积/mL 在121℃灭菌所需少时间/min

20-50    15

75-150   20

250-500  25

1000     30

组培设备到达保压时间后,即可切断电源,在压力到0.5MPa,可缓慢放出蒸汽,应注意不要使压力降低太快,以致引起激烈的减压沸腾,使容器中的液体四溢。当压力降到零后,才能开盖,取出培养基,摆在平台上,以待冷凝。不可久不放气,引起培养基成分变化,以至培养基无法摆斜面。一旦放置过久,由于锅炉内有负压,盖子打不开,只要将放气阀打开,大气压入,内外压力平衡,盖子便易打开了。

组培设备对高压灭菌后不变质的物品,如无菌水、栽培介质、接种工具,可以延长灭菌时间或提高压力。而培养基要严格遵守保压时间,既要保压,又要防止培养基中的成分变质或效力降低,不能随意延长时间。

对于一些布制品,如实验衣、口罩等也可用高压灭菌。洗净晾干后用耐高压塑料袋装好,高压灭局20-30分钟。

高压灭菌前后的培养基,其PH值下降0.2-.3单位。组培设备高压后培养基PH值的变化方向和幅度取决于多种因素。在高压灭菌前用碱调高PH值至预定值的则相反。培养基中成分单一时和培养基中含有高或较高浓度物质时,高压灭菌后的PH值变化幅度较大,甚至可大于2个PH值单位。环境PH值的变化大于0.5单位就有可能产生明显的生理影响。

组培设备备高压灭菌通常会使培养基中的蔗糖水解为单糖,从而改变培养基的渗透压。在8%-20%蔗糖范围内,高压灭菌后的培养基约升高0.43倍。

组培设备培养基中的铁在高压灭菌时会催化蔗糖水解,可使15%-25%的蔗糖水解为葡萄糖和果糖。培养基值小于5.5,其水解量更多,培养基中添加0.1%活性炭时,高压下蔗糖水解大大增强,添加1%活性炭,蔗糖水解率可达5%。

组培设备为防止高压灭菌产生的上诉一些变化可用下列方法:

(1)经常注意搜集有关高压灭菌影响培养基成分的资料,以便及时采取有效措施。

(2)设计培养基配方时尽量采用效果类似的稳定试剂并准确掌握剂量。如避免使用果糖和山梨醇而用甘露醇,以IBA代替IAA,控制活性炭的用量(在0.1%以下)注意PH值对高压灭菌下培养基中成分的影响等。

(3)配制培养基时应注意成分的适当分组与加入的顺序。如将磷、钙和铁放在后加入。

(4)注意高压灭菌后培养基PH值的变化及回复动态。如高压灭菌后的PH值常由5.8升高至6.48。而96小时后又回降至5.8左右。这样在实验中就可以根据这一规律加以掌握。


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